[发明专利]一种用于组织工程的分子印迹多孔凝胶膜的制备方法

权利要求书

1.一种用于组织工程的分子印迹多孔凝胶膜的制备方法，其特征是以生长因子、多肽、蛋白质等生物活性分子为模板分子，以具有良好生物相容性并可降解吸收的天然高分子海藻酸钠为基体，以水溶性高分子或无机盐为致孔剂，采用绿色环保的水相印迹方法，制备厚度可控的分子印迹多孔凝胶膜，可以根据细胞培养的需要，获得对不同模板分子具有识别和缓释性能的细胞培养多孔凝胶膜支架，用于调控细胞的生长。

2.如权利要求1所述的一种用于组织工程的分子印迹多孔凝胶膜的制备方法，其特征是包括以下步骤：

a)配制质量百分比为1％-5％的海藻酸钠、质量百分比为0-5％的改性剂、质量百分比为0-5％的模板分子和质量百分比为0-3％的致孔剂的混合水溶液，静置消泡后待用；同时配制质量百分比浓度为0.5％-15％的氯化钙水溶液；

b)取步骤a)得到的含改性剂、模板分子和致孔剂的海藻酸钠混合水溶液1-5g，倒入表面干洁的平放的玻璃片上，用厚度为20-1000μm的刮膜棒刮平，形成均匀厚度的膜，然后立即连同玻璃片一起浸泡入步骤a)配制的氯化钙水溶液中，继续浸泡0.5-12小时，用去离子水冲洗3-5遍，得到包埋模板分子的海藻酸钙基凝胶膜；

c)将步骤b)得到的包埋模板分子的海藻酸钙基凝胶膜用去离子水振荡洗脱8-48小时，除去水溶性高分子致孔剂，用pH＝2-4的稀盐酸浸泡8-24小时除去无机盐致孔剂，然后用洗脱液振荡洗脱8-48小时除去模板分子，得到分子印迹海藻酸钙基多孔凝胶膜；

d)将步骤c)得到的分子印迹海藻酸钙基多孔凝胶膜经过交联剂增强处理和灭菌消毒处理，得到用于组织工程的分子印迹多孔凝胶膜。

3.如权利要求1所述的一种用于组织工程的分子印迹多孔凝胶膜的制备方法，其特征是所述的模板分子生长因子为表皮生长因子、神经生长因子、血管内表皮生长因子、血小板来源生长因子、转化生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子、白细胞介素类生长因子、红细胞生长素的中一种或两种以上混合物；所述的模板分子多肽为粘菌素、杆菌肽、万古霉素、三环糖肽的中一种或两种以上混合物；所述的模板分子蛋白质为牛血清白蛋白、牛血红蛋白、肌红蛋白、卵白蛋白、胃蛋白酶、溶菌酶、细胞色素C、过氧化氢酶、γ球蛋白中的一种或两种以上混合物。

4.如权利要求1所述的一种用于组织工程的分子印迹多孔凝胶膜的制备方法，其特征是所述的水溶性高分子致孔剂为聚乙二醇、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、聚乙烯基吡咯烷酮、水溶性淀粉中的一种或两种以上混合物，所述的无机盐致孔剂为磷酸三钠、磷酸氢二铵、碳酸钠、磷酸钙、碳酸钙中的一种或两种以上混合物。

5.如权利要求2所述的一种用于组织工程的分子印迹多孔凝胶膜的制备方法，其特征是所述的改性剂为聚氧乙烯醚、羧甲基壳聚糖、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、硅酸钠中的一种或两种以上混合物。

6.如权利要求2所述的一种用于组织工程的分子印迹多孔凝胶膜的制备方法，其特征是所述的洗脱液为PBS缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、生理盐水、SDS缓冲溶液、草酸水溶液中的一种。

7.如权利要求2所述的一种用于组织工程的分子印迹多孔凝胶膜的制备方法，其特征是所述的交联剂为戊二醛、京尼平、碳二亚胺、琥珀酸酐中的一种或两种以上混合物。

8.如权利要求2所述的一种用于组织工程的分子印迹多孔凝胶膜的制备方法，其特征是所述的灭菌消毒处理方法包括紫外线灭菌消毒、湿热灭菌消毒和环氧乙烷灭菌消毒。