[发明专利]用于检测生物样品中病原体的方法和系统

说明书

技术领域

本公开内容涉及诊断方法，且特别是用于检测体液中病原体的方法和系统。

背景技术

视为作为背景与本发明公开的主题相关的参考文献列出如下：

-J.Keiser,J.Utzinger,Z.Premji,Y.Yamagata和B.H.Singer于Annals of Tropical Medicine&Parasitology中,卷96,号7,643–654(2002)

-美国专利号5,470,751

-Centers for Disease Control and Prevention CDC的在线出版物,Diagnostic Procedures,2009“Blood specimens:Microscopic Examination”at http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/Frames/DiagnosticProcedures/body_dp_bloodexamin.htm

本文中对上述参考文献的承认不应被推断为意指这些以任何方式与本发明公开的主题的专利性相关。

背景

染色是生物学和医学中常用的技术以突出生物组织中的结构用于观察，经常借助于不同的显微镜。着色剂(stain)可被用于定义和检查大量组织(bulk tissue)(突出显示，例如，肌纤维或结缔组织)、细胞群(例如，分类不同的血细胞)、或单独细胞内的细胞器。

使用细胞染色以在显微镜下更好地可视化细胞和细胞组分。通过使用不同的着色剂，人们可优先染色某些细胞组分，诸如核或细胞壁，或整个细胞。可对固定的、或非活细胞、以及对活细胞使用着色剂。

细胞染色技术还经常被用于检测血液样品中的病原体。一种重要的病原体是疟疾。

在1876年，合成了用于通过染色检测的第一种染料(dye)亚甲蓝。六年后，其被用于发现结核杆菌。数年内，采用修饰的MB，包括，与其他染料组合的“成熟的”MB，诸如伊红，其允许区分血细胞和疟疾寄生物的核，以及MB亚甲基蓝去甲基化与作为稳定剂的甘油在甲醇溶剂中的组合，被称为Malachowski-赖特-姬姆萨着色剂。

J.Keiser等人描述了与姬姆萨着色剂相比，吖啶橙用于疟疾诊断，包括其诊断性能、其推广和实施、以及控制疟疾的影响。

美国专利号5,470,751描述了用于染色疟疾感染的细胞的另一种试剂和使用该试剂检测疟疾感染的细胞的方法，其中试剂是包含金胺类似物，诸如金胺O的至少一种第一染料和稠合的苯衍生物诸如3,3'-二乙基-2,2'-氧杂羰花青碘化物的至少一种第二染料的染色溶液。将试验样品用试剂处理以染色疟疾感染的细胞。然后将染色的疟疾感染的细胞进行光学检测。

此外，Centers for Disease Control and Prevention CDC,Diagnostic Procedures，2009在“Blood specimens:Microscopic Examination”的标题下描述了使用染色核酸的荧光染料用于检测血液寄生物，诸如疟原虫的Kawamoto技术。如该出版物中所讨论的，在Kawamoto技术中，将载玻片上的血涂片用吖啶橙(AO)染色，并用荧光显微镜或配备有干涉滤光器系统的光学显微镜来检查。这导致核DNA为绿色且细胞质RNA为红色的差别染色，其允许识别寄生物。

概述

本公开内容根据其各方面的第一个方面提供了，检测样品中病原体感染的方法，该方法包括：

-用两种或更多种染料染色所述身体样品，所述两种或更多种染料包括主要染色DNA的至少一种染料，由此在DNA和不同于DNA的至少一种其他细胞组分之间提供差别染色；

-如果DNA存在于样品中，鉴定包含DNA的至少第一染色区，以及包含其他细胞组分的至少一个其他染色区；

-提取第一染色区和至少一个其他染色区的结构特征，所述结构特征包括以下中的至少一个：(i)第一染色区和一个其他染色区的至少一个的大小和(ii)所述第一染色区和所述至少一个其他染色区关于彼此的位置；以及

-如果第一染色区被鉴定且所述结构特征符合预定为表征可疑病原体的结构特征，则确定样品中可疑病原体的存在。

根据第二个方面，本公开内容提供了试剂盒，包括：

-第一染料，所述第一染料主要染色DNA；

-第二染料，所述第二染料用于染色不同于DNA的至少一种其他细胞组分；