[发明专利]TORCH五项IgG抗体检测试剂盒及其制备

说明书

技术领域：

本发明涉及一种病原微生物的检测试剂，特别涉及一种TORCH五项IgG抗体（条带免疫印迹法）检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒用于检测样本中TORCH五项，即弓形虫（TOX）、风疹病毒（RV）、巨细胞病毒（CMV）和单纯性疱疹1型和2型病毒（HSV-I/II）的IgG类的抗体。

背景技术：

TORCH指可导致先天性宫内感染及围产期感染，从而引起围产儿畸形的一组病原微生物的英文名称缩写，其中T（Toxopasma)是弓形虫，R(Rubella.Virus)是风疹病毒，C(Cytomegalo.Virus)是巨细胞病毒，H(Herpes.Virus)即是单纯疱疹I/II型。TORCH这组微生物感染有着共同的特征，均可造成母婴感染。孕妇由于内分泌改变和免疫力下降易发生原发感染，而既往感染的孕妇体内潜在的病毒也容易被激活而发生复发感染。孕妇发生TORCH感染时，病毒可通过胎盘或产道传播感染胎儿，引起早产、流产、死胎或畸胎等，以及引起新生儿多个系统、多个器官的损害，造成不同程度的智力障碍等症状。TORCH的感染与优生优育有重要而密切的关系。

弓形虫（TOX）：孕早期弓形虫感染引起的胎儿畸形主要包括：脑积水、小脑畸形、脉络膜视网膜炎及脑钙化。血行感染可引起胎儿多器官坏死性损害，如肝脾肿大、心肌炎及血小板减少症等。

风疹病毒（RV）：主要通过呼吸道传播，孕妇感染后能使胎儿致畸，病毒通过胎盘感染胎儿形成先天性感染，称为先天性风疹综合症(CRS)，主要是先天性白内障、先天性心脏病和神经性耳聋，20周后感染者几乎无影响。风疹感染发生在孕期越早，胎儿的致畸也越严重。

巨细胞病毒（CMV）：感染后能引起宫内胎儿生长迟缓、小头形、脑炎、视网膜脉膜炎、黄疸、肝脾肿大、溶血性贫血等，新生儿死亡率较高，围产期母乳排毒所致的CMV感染率为63%。

单纯疱疹病毒（HSV I/II型）：通常潜伏在神经节，妊娠时母体的生理变化使HSV活化，孕早期感染能破坏胚芽面导致流产，孕中晚期虽少发畸胎，但可引起胎儿和新生儿发病。

因此，为减少病残儿的出生率及提高出生人口素质，临床工作者应进一步加强对孕妇的宣传教育，积极做好TORCH感染的血清学筛查以便及早发现不良妊娠并及时处理；对新生儿也应常规开展TORCH检测，了解新生儿TORCH感染情况，以便早干预、早治疗。TORCH感染的筛查对优生优育具有重要现实意义。

TORCH五项中IgG类抗体为TORCH既往感染或感染期的重要指标；IgM为早期感染指标，胎盘中特异性IgM的检测是诊断胎儿宫内感染的可靠依据；而TORCH五项中IgG抗体和IgM抗体的联合检测，是判断TORCH早期感染或既往感染的重要方法。

我国常用ELISA酶联免疫技术或金标快速检测技术分别检测TOCRH五项IgM或IgG类抗体，但该方法的检测结果易受到类风湿因子等方面的干扰，缺乏精确度。

免疫印迹法是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。其原理是经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 

目前应用条带免疫印迹技术联合检测TOCRH五项IgM或IgG类抗体的方法未见报道，本发明经过研究，用条带免疫印迹法测定TOCRH五项IgM或IgG类抗体，精确度高，灵敏度高，操作简单，无干扰，价格便宜。

发明内容：

本发明提供一种高灵敏度、高特异性、质量稳定，操作方面，价格便宜并能满足TORCH五项IgG类抗体检测试剂盒的制备方法。

本发明的TORCH五项IgG抗体（条带免疫印迹法）检测试剂盒，包含以下试剂：

1）包被有TORCH五项IgG类抗体的总裂解抗原和特异性重组抗原的检测试剂条，

2）样本稀释液，

3）标记有辣根过氧化酶的酶工作液，

4）显色剂A、

5）显色剂B，

6）20倍浓缩洗液。