[发明专利]小鼠腹水诱导剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗体制备领域，具体地说，涉及小鼠腹水诱导剂及其应用。

背景技术

目前，小鼠腹水抗体制备中一般采用与杂交瘤SP20相同系的小鼠。常用的诱导剂为pristane和液体石蜡。这两种诱导剂都属于免疫抑制剂，抑制动物的正常免疫功能从而促进肿瘤生长（Hoogenraad,N.J.and Wraight,C.J.,The effect of Pristane on Pristane on ascites tumor formation and monoclonal antibody production,Methods Enzymol.,121,375,1986）。采用pristane进行诱导，每只小鼠可以采集约5-10ml腹水。然而诱导剂pristane成本很高，不适合大规模生产。另外，在免疫性动物疾病模型中也常使用pristane，比如关节炎，pristane肾病等，这表明pristane本身会对动物造成一定的健康损害，不符合动物福利的要求。此后，用液体石蜡或者不完全佐剂代替pristane。尽管液体石蜡成本低，但用其诱导小鼠后，小鼠体内易长实体瘤，易导致动物窘迫死亡，且腹水产量不高，约2-5ml。对于规模化生产来说，既费时又增加了成本。以上两种诱导剂，诱导周期在7-15天，腹水生产时间较长，一般诱导后10-21天开始采集腹水。相比而言，不完全佐剂比上述两种诱导剂的诱导效果更好，但这种预刺激方法会给腹水带来更多的细胞因子和其他炎性介质的污染。因此，开发新型的小鼠腹水诱导剂成为小鼠腹水抗体制备领域亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的小鼠腹水诱导剂。

本发明的另一目的是提供该新型的小鼠腹水诱导剂在小鼠腹水抗体制备中的应用。

为了实现本发明目的，本发明的一种小鼠腹水诱导剂，其有效成分为液体石蜡、羊毛脂、卡介苗、白介素及人B淋巴细胞刺激因子。

各组分按重量份计为：

优选地，各组分按重量份计为：

本发明还提供上述小鼠腹水诱导剂的制备方法，将液体石蜡、羊毛脂、卡介苗、白介素及人B淋巴细胞刺激因子按比例混合均匀，-20℃保存。

本发明进一步提供上述小鼠腹水诱导剂在小鼠腹水抗体制备中的应用：用诱导剂腹腔注射小鼠，2-3天后，腹腔注射杂交瘤细胞，7-10天后采集腹水，测定腹水中抗体效价后，进行抗体纯化。

小鼠腹水抗体制备中优选使用的小鼠为BALB/c小鼠，小鼠鼠龄为40-80天（优选60天）。每只小鼠的诱导剂注射剂量为0.5ml/25g（按体重计），每只小鼠注射1×10⁶-2×10⁶个杂交瘤细胞。

本发明的优点及有益效果：

本发明的新型小鼠腹水诱导剂可直接刺激杂交瘤细胞在小鼠体内快速增殖，并大量分泌抗体。腹水生产周期短，腹水量多，效价高，小鼠腹腔很少出现实体瘤，因此不容易受到实体瘤压迫造成小鼠过早死亡。将本品用于小鼠腹水抗体的大量制备，节约了成本（成本降低5倍以上），节省了小鼠的饲养费及人工成本，具有可观的经济效益。

附图说明

图1为本发明实施例6中westorn blot检测小鼠腹水抗体的结果；其中，1-3为A组小鼠腹水抗体检测结果，腹水稀释比例分别为1:500、1:1000和1:2000，4-6为B组小鼠腹水抗体检测结果，腹水稀释比例分别为1:1000、1:5000和1:10000。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

实施例1小鼠腹水诱导剂的制备

诱导剂配方为：

制备方法：将液体石蜡、羊毛脂、卡介苗、白介素及人B淋巴细胞刺激因子按比例混合，-20℃保存。

实施例2小鼠腹水诱导剂的制备

诱导剂配方为：

制备方法同实施例1中的描述。

实施例3小鼠腹水诱导剂的制备

诱导剂配方为：

制备方法同实施例1中的描述。

实施例4小鼠腹水诱导剂的制备

诱导剂配方为：

制备方法同实施例1中的描述。

实施例5小鼠腹水诱导剂的制备

诱导剂配方为：