[发明专利]植物提取液中单宁含量的检测方法

说明书

技术领域

    本发明涉及一种丹宁含量的检测方法，具体涉及植物提取液中单宁含量的检测方法。

背景技术

单宁是多酚中高度聚合的化合物，含有许多酚羟基结构，相对份子质量为500～4000，可以和蛋白质、生物碱、多糖及多种金属离子发生络合反应，已广泛应用于医药、食品、制革、日用化学品、水处理等领域。单宁具有较强的化学和生理活性，对生物体的影响具有双重性，食物中的单宁过量会产生比如减少蛋白质、维生素的有效吸收等抗营养的作用。因此，检测食物中单宁的含量具有非常重要的意义。

目前，应用于单宁检测的方法主要有皮粉法、滴定法、干酪素法和比色法等传统经典方法及色谱法、荧光法和流动注射法等现代检测方法，但这些检测方法均具有缺陷，主要体现在以下几个方面：1、现有单宁检测方法中，向待测检测样品中加入的物质，容易与单宁份子量发生反应，从而在计算待测样品中单宁含量时，往往误差会比较大，从而检测结果不准确；2、整个检测过程容易受外界温度，待检测样品的选择等其他因素的影响，检测结果重复性差； 3、检测结果易受提取液中色素的影响； 4、整个检测过程操作繁琐，耗时耗力；5、检测需要大型仪器和专业的操作人员，对操作人员的要求较高，应用范围窄。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明要解决的技术问题是：如何提供一种简单，且重现性和稳定性好的检测植物提取液中单宁含量方法。

解决该技术问题，本发明是这样实现的：植物提取液中单宁含量的检测方法，具体步骤如下：

步骤1：制备显色液，将0.1 mol/L的氯化铁水溶液和0.3mol/L的硫氰酸胺水溶液按照1：1的体积混合； 

步骤2：取单宁标准品溶于蒸馏水中得到浓度为0.2mg/mL的单宁水溶液作为单宁标准溶液；

步骤3：取1.0mL步骤2中的单宁标准溶液至最大刻度为10ml的容量瓶中，并往所述单宁标准溶液中依次加入0.1～0.5mL显色液和0.2～1.2mL浓度为10^-3mol/L的氢氧化钠水溶液，再加入体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液至该容器的最大刻度后摇匀，并室温避光静置10～20min；然后以体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液为参比，用紫外-可见分光光度计检测加入所述显色液、氢氧化钠水溶液和二甲基甲酰胺水溶液后的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的光谱曲线，并确定在该范围内单宁标准溶液的最大吸收波长；

步骤4：取步骤2中的单宁标准溶液0.0 mL，0.5 mL，1 mL，1.5 mL，2.0 mL，2.5 mL和3.0mL分别置于7只最大刻度为10mL的容量瓶中，往7只容量瓶中分别依次加入0.1～0.5mL显色液和0.2～1.2mL浓度为10^-3mol/L的氢氧化钠水溶液，再加入体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液至各个容器最大刻度得到7份单宁浓度c各不相同的混合溶液，分别将7份混合溶液摇匀，并室温避光静置10～20min；然后以体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液为参比，用紫外-可见分光光度计检测所述各份混合溶液对步骤3中确定的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长的吸光度A；然后以各份混合溶液中单宁的浓度c为横坐标，各份混合溶液对步骤3中确定的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长的吸光度A为纵坐标制图，该图作为单宁标准曲线；

步骤5：取1.0ml待测单宁样品溶液置于最大刻度为10mL的容量瓶中，往所述待测单宁样品溶液中依次加入0.1～0.5mL显色液和0.2～1.2mL浓度为10^-3mol/L的氢氧化钠水溶液，再加入体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液至该容器的最大刻度得到待测单宁样品混合溶液，将待测单宁样品混合溶液摇匀，并室温避光静置10～20min，以体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液为参比，用紫外-可见分光光度计检测单宁样品溶液对步骤3中确定的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长的吸光度A^’；

步骤6：根据式（1）计算待测单宁样品溶液中单宁的含量：

       （1）