[发明专利]同时检测谷物中黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色谱-荧光法

权利要求书

1.同时检测谷物中黄曲霉毒素B₁、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色谱-荧光法，其特征在于该方法包括以下步骤：

（1）谷物样品中待测毒素提取液的制备

（1-1）准确称取5 g磨碎的谷物样品，精确至0.01 g，置于50 mL 具盖离心管A中，加入15 mL通用型提取液，剧烈振荡1 min，然后于摇床上以60 r/min振摇20 min，接着加入20 mL乙腈，60 r/min振摇10 min后，加入3 g 无水硫酸镁和2 g氯化钠作为复合盐析试剂，迅速并剧烈振荡1 min，以3500 r/min离心10 min，取出上层溶液至100 mL磨口烧瓶B中，待用；

（1-2）往离心管A中再加入15 mL乙腈，经过剧烈振荡1 min后，以3500 r/min离心10 min，取出上层溶液，并与步骤（1-1）中取出的提取液合并于烧瓶B中，于40℃下减压浓缩近干；

（2）提取液净化

往烧瓶B中加入4 mL正己烷和1 mL酸性乙腈作为净化试剂充分荡洗，收集荡洗液，以3500 r/min离心后，弃去上层正己烷层，收集下层溶液于2.0 mL离心管C中，并用0.5 mL酸性乙腈重复洗涤烧瓶B 2次，收集荡洗液至离心管C中定容至2 mL，以15000 r/min离心1 min，取上清液过0.22 μm滤膜，得到待测样品溶液，供液相色谱分析；

（3）测定

（3-1）标准工作液和待测样品溶液在设定的液相色谱条件下进样，即将标准工作液和待测样品溶液注入高效液相色谱仪分离，并采用荧光检测器检测，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，待测样品溶液中真菌毒素的响应值应该在荧光检测器的线性范围内；

（3-2）在上述液相色谱条件下，若待测样品溶液中出现的真菌毒素色谱峰保留时间与标准工作液一致，则判断待测样品中存在相应的被测物，允许偏差小于±2.5%。

2.根据权利要求1所述的同时检测谷物中黄曲霉毒素B₁、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色谱-荧光法，其特征在于：步骤（1-1）中所述通用型提取液为12 mL冰乙酸以蒸馏水定容至100 mL制成。

3.根据权利要求1所述的同时检测谷物中黄曲霉毒素B₁、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色谱-荧光法，其特征在于：步骤（2）中所述酸性乙腈为乙酸和乙腈按照体积比1:9混合制成。

4.根据权利要求1所述的同时检测谷物中黄曲霉毒素B₁、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色谱-荧光法，其特征在于步骤（3）中所述液相色谱条件为：

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5.根据权利要求1所述的同时检测谷物中黄曲霉毒素B₁、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色谱-荧光法，其特征在于步骤（3）中所述荧光检测器为四通道荧光检测器，设定的四种真菌毒素的四通道荧光检测器的参数为：

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6.根据权利要求1所述的同时检测谷物中黄曲霉毒素B₁、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色谱-荧光法，其特征在于步骤（3）中所述荧光检测器为单通道荧光检测器，设定的四种真菌毒素的单通道荧光检测器的程序时间波长参数为：

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