[发明专利]一种用中草药对超氧自由基的清除方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学技术领域，具体涉及一种用中草药对超氧自由基的清除方法。

背景技术

自由基在人体内能引起机体氧化，损害细胞，导致机体衰老和各种疾病。自由基是一种外层轨道含有未配对电子的特殊状态分子或原子团，其中超氧自由基(O-2·)与人体最为密切。一些物质，如超氧化物歧化酶(SOD)、维生素C、维生素E、胡萝卜素等能清除人体的自由基。但体内的O-2·浓度随年龄的增长而增加，自由基清除能力则随年龄的增加而减少，有时不能提供足够的量来消除O-2·。因此研究和寻找外源性O-2·清除剂在人体保健、治病方面，从天然动植物，尤其是从中草药中寻找高效的超氧自由基清除剂，具有重要意义。分子氧在单电子还原时有超氧阴离子自由基O-2·中间体生成。O-2·既可作为电子的给予体，又可接受电子，在体内可通过电子转移反应衍生出其它活性氧。从研究的角度来说，获得O-2·有多种方法。且采用化学法产生O-2·，对比了邻苯三酚、亚甲基兰、二甲基亚砜生成O-2·的效率。

中草药含有多种能够清除自由基的化合物，其抗氧化成分可归纳为6大类：黄酮类、苯酚类、皂苷类、鞣质类、生物碱类和其他类。近年来对中药抗自由基作用的研究多采用电子自旋共振、化学发生等方法，用电化学方法研究中药对超氧自由基的清除作用还未发现。但是后者也有其优势所在，所用仪器简单，操作简单，成本低，相对于化学发光法，不受到溶液颜色和惰性杂质的影响。

发明内容

本发明的技术方案在于利用电化学分析方法，采用中草药对超氧自由基的清除，延缓机体衰老。

为了实现上述技术方案，本发明采用的具体步骤如下：

一、采用的实验仪器和试剂及中草药的选择

(一)采用的仪器

1、极谱分析仪：JP-303型极谱分析仪(甘肃分析仪器厂)；

2、三电极系统：滴汞电极、饱和甘汞电极和铂电极组成的三电极系统；

3、电子天平：(AL104，梅特勒-托利多仪器有限公司)；

4、酸度计PHS-3C型酸度计(甘肃科学分析仪器厂)。

(二)采用的试剂

1、邻苯三酚为(兰州兴隆化工有限公司)，

2、三羟甲基氨基甲烷为(兰州兴隆化工有限公司)，

3、其余试剂均为国产分析纯，实验用水均为二次蒸馏水。

(三)采用的中草药有：红花、何首乌、当归、苡米、白芷、丹参、黄芩、茯苓。

二、采用的方法与结果

1、采用超氧自由基化学发生体系的方法

分别制取0.2mmol/L邻苯三酚溶液、1mg/ml亚甲基兰溶液、3.5mg/ml二甲基亚砜溶液、0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液、pH＝9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液。在25.0ml的0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液中加入5.0ml的0.1mol/L盐酸，稀释至100ml，得到pH＝9.0的缓冲溶液。取10.0ml为底液，加入1.0ml的0.2mmol/L邻苯三酚溶液，再加2.00ml蒸馏水。采用线性扫描法记录二阶导数极谱波。

移取10.0ml pH＝9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液，加入1.0ml的3.5mg/ml二甲基亚砜溶液，再加2.0ml蒸馏水。采用线性扫描法记录二阶导数极谱波。移取10.0ml pH＝9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液，加入1.0ml的1mg/ml亚甲基兰溶液，再加2.0ml蒸馏水。采用线性扫描法记录二阶导数极谱波。

2、超氧自由基化学发生体系的结果，在pH＝9.0的HCl-Tris缓冲溶液中，邻苯三酚可发生自氧化反应产生超氧自由基阴离子，在-0.676V处有一还原峰，此峰为检测对象，它先逐渐增高，到一定时间后又缓慢降低。峰高随时间变化。此峰在4.0min处最高，且变化较小，记录该峰在此时间点的峰高值作为空白对照读数。在pH＝9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液中，二甲基亚砜和亚甲基兰均可发生自氧化反应产生超氧自由基阴离子，两者分别在-0.700V、-0.682V处有一还原峰，峰形均先逐渐增高，到一定时间后又缓慢降低。峰高随时间的变化，二甲基亚砜在4.0min处最高，且变化较小；亚甲基兰在3.0min处最高，且变化较小。分别取此峰高最大处的时间点作为分析点，记录峰高值作为空白对照读数。

三、中草药清除超氧自由基的方法