[发明专利]一种适用于烷基酚类药物人工抗原的合成方法

权利要求书

1.一种适用于烷基酚类药物人工抗原的合成方法，其特征在于：以壬基酚类似物为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联，用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定偶联物的偶联比；具体包括如下步骤：

(1)人工抗原的合成：

(a)壬基酚类似物、N-羟基硫代琥珀酰亚胺、碳二亚胺、牛血清白蛋白以摩尔比为80∶120∶136∶1的比例反应，将壬基酚类似物溶于N，N-二甲基甲酰胺DMF溶液中，然后转移到棕色小瓶中，加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulf-NHS)和碳二亚胺(EDC)，室温反应6h，制得A液；将牛血清白蛋白(BSA)溶解到磷酸盐(PBS)缓冲液中，制得B液；然后将A液缓慢滴加到B液中，室温反应3h，离心去掉沉淀，取上清液即得到烷基酚类药物人工抗原混合液；

(b)透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；

(c)将步骤(1)制得的烷基酚类药物人工抗原混合液移入透析袋中，每天先用0.01M的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液透析2次，磷酸盐缓冲溶液每次用量2L，再用去离子水透析2次，去离子水每次用量2L，共透析3天；最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，得到壬基酚类似物-牛血清白蛋白，即是烷基酚类药物人工抗原；

(2)人工抗原的鉴定：采用紫外扫描仪测定得到的壬基酚类似物-牛血清白蛋白的偶联比，分别在272nm、278nm波长处测吸光值，并计算偶联比。

2.如权利要求1所述的适用于烷基酚类药物人工抗原的合成方法，其特征在于：所述壬基酚类似物是10-苯基癸酸。

3.如权利要求2所述的适用于烷基酚类药物人工抗原的合成方法，其特征在于：所述壬基酚类似物通过如下方法制备：取摩尔比为1∶1的庚二酸二甲酯和庚二酸，在pH为11的氢氧化钠碱性溶液中水解反应12小时得到庚二羧酸酯，然后再加入亚硫酰氯在苯中反应，得到庚二羧酸氯酯；将庚二羧酸氯酯滴入到苯甲醚的二氯乙烷溶液中，在0℃下搅拌反应24小时，用乙醚萃取，然后再用锌粉和醋酸汞在甲苯中回流反应6小时；旋蒸干后用乙醇溶解，并加入10％氢氧化钠溶液回流水解反应6小时，再旋蒸干得沉淀；将沉淀用冰醋酸溶解，并加入48％的溴化氢回流反应6小时，再旋蒸干，并在乙醇中重结晶，得到带有羧基的壬基酚类似物(NPA)，即10-苯基癸酸。

4.如权利要求1所述的适用于烷基酚类药物人工抗原的合成方法，其特征在于：所述人工抗原的鉴定方法具体如下：将偶联产物壬基酚类似物-牛血清白蛋白用超纯水稀释到150μg·mL^-1，以超纯水作空白对照，用紫外扫描仪测稀释液在272nm、278nm波长处的吸光值，稀释液在272nm的吸光值为A₁，稀释液在278nm的吸光值为A₂，依据公式r＝(A₁×ε_B278-A₂×ε_B272)/(A₂×ε_A272-A₁×ε_A278)计算偶联比；式中：ε_A为壬基酚类似物的摩尔吸光系数，ε_A272为272nm处的摩尔吸光系数，ε_A278为278nm处的摩尔吸光系数；ε_B为牛血清白蛋白的摩尔吸光系数，ε_B272为272nm处的摩尔吸光系数，ε_B278为278nm处的摩尔吸光系数。