[发明专利]埃博拉病毒荧光定量PCR检测新方法及埃博拉病毒检测PCR体系

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及埃博拉病毒的快速定性和定量检测方法，提供一对特异性引物和探针。

背景技术

埃博拉病毒(Ebola virus，EBOV)能够引起一种人畜共患传染病，即埃博拉出血热(Ebola hemorrhagil fever，EBHF)，1976年在苏丹南部和扎伊尔即现在的刚果(金)的埃博拉河地区首次爆发，患者死亡率高达90％，引起医学界的广泛关注，埃博拉病毒由此得名。埃博拉病毒感染性极强，可通过直接接触感染者的体液或其他感染组织、皮肤溃破伤口和飞沫等多种途径传播。感染者会出现严重的出血现象并导致休克综合征。世界卫生组织已经将EBOV列为对人类危害最严重的病毒之一，即第4级病毒，与其相关的试验操作必须在P4级实验室中进行。

目前用于埃博拉病毒的检测方法已经有免疫组织化学检查、血清学检测、电镜检查、病毒分离、RT-PCR核酸检测、real-time RT-PCR核酸检测，每种方法都有各自优势与缺陷，但荧光定量PCR核酸检测的方法不失为公认的一种更直观、更快速的一种适合早期诊断的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种埃博拉病毒荧光定量PCR检测新方法及埃博拉病毒检测PCR体系，该方法能够快速定性和定量检测埃博拉病毒，包括一对特异性更高、灵敏度高、重复性好的引物和探针。

为实现上述目的，本发明埃博拉病毒荧光定量PCR检测新方法中设计采用的引物探针为：

  Name  Sequence   Position   Tm℃   Modification   引物1  CAAGGACTGATACAATATCCAACAG  1025-1049   58    引物2  GAATTTGAAATCACAGCATCGT   1164-1185   57.1    探针  TGGCAATCAGTAGGACACATGATGGTG  1052-1078   69   Texas Red/BHQ-2

进一步，所述的埃博拉病毒荧光定量PCR检测新方法，具体为：

1)设计引物探针；

2)根据仪器选择荧光素；

3)合成引物和探针；

4)制备阳性质粒标准品；

5)运行PCR；

6)数据分析；

7)提取病毒RNA进行体系验证。