[发明专利]一种银杏内酯A的制备方法

说明书

技术领域

本发明具体的涉及一种银杏内酯A的制备方法。

背景技术

银杏(Ginkgobilobal.)为银杏科银杏属植物。银杏树出现于二亿年前，在冰川世纪几近灭种，仅在我国幸存，被达尔文称为“活化石”。随着银杏叶研究的发展，现已证明：银杏叶的活性成分主要是黄酮和内酯类化合物。其中内酯类化合物有：银杏内酯A(BN52020)、银杏内酯B(BN52021)、银杏内酯C(BN52022)、银杏内酯M(BN52023)、银杏内酯J(BN52024)及白果内酯，已证明银杏内酯均为强血小板活化因子(platelet-activating factor，PAF)受体拮抗剂。它们独特的药理作用和治疗价值已引起世界范围制药工业的极大兴趣。

随着对银杏叶中有效药用成分的明确，单一有效成分新药成为近十年来开发的目标。银杏内酯是仅在银杏叶中发现的一类具有特殊结构及显著药理活性的重要成分，迄今尚未发现存在于其他任何植物中。更重要的是它们具有独特的药理作用和治疗价值。

目前银杏叶仍是提取银杏内酯化合物的主要工业生产来源。银杏内酯的提取分离方法报道较多，但由于银杏叶中这类化合物含量很低，且具有特定结构，因此，提取分离步骤费时且得率低。何珺等人发表的“DA201型大孔吸附树脂分离银杏叶提取物中银杏内酯A、B、C和白果内酯的研究”(何珺，何照范等.DA201型大孔吸附树脂分离银杏叶提取物中银杏内酯A、B、C和白果内酯的研究[R].中草药.2004.12(35))中采用大孔吸附树脂DA201提纯，并通过两次结晶的办法得到纯度为95％的银杏内酯A，此方法的缺点在于树脂的提取收率低，只有62％，且银杏内酯A的纯度不高，因此结晶后的纯度只有95％。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的银杏内酯A的提取分离方法中，收率和纯度都很低的缺陷，而提供了一种银杏内酯A的制备方法。本发明的制备方法不仅产物收率高，且可以达到很高的产物纯度。

本发明人经过大量研究，发现采用一种特别选择的大孔反相吸附树脂对银杏叶粗提物进行分离，可得到很高收率的银杏内酯A。本发明人还进一步优化了吸附洗脱条件，使得银杏内酯A的收率大于85％，且纯度大于90％，并且可通过两次结晶使得银杏内酯A的纯度达到98％以上。

因此本发明涉及一种银杏内酯A的制备方法，其包含下列步骤：将银杏叶粗提物用大孔反相吸附树脂进行柱层析分离，即可；所述的大孔反相吸附树脂的参数如下：粒径为50～100μm，孔径为树脂骨架为聚苯乙烯-二乙烯苯。其中，所述的孔径较佳的为所述的粒径较佳的为60～80μm。所述的大孔反相吸附树脂更佳的为苏州纳微生物科技有限公司生产的大孔反相吸附脂，型号为NM PS100，其粒径为：50～100μm，孔径为树脂骨架为聚苯乙烯-二乙烯苯。

所述的大孔反相吸附树脂在使用前，较佳的先进行预处理，预处理的方法可为本领域常规的预处理该类树脂的方法。优选的方法如下：用酸水溶液冲洗树脂，再用去离子水洗到中性，即可。其中，所述的酸水溶液中的酸可为无机酸，如盐酸，其摩尔浓度较佳的为0.5～2.5N，优选1N。酸水溶液较佳的为酸的丙酮水溶液，丙酮的体积浓度较佳的为60～90％，优选70％。酸水溶液的用量较佳的为2～5个柱体积，优选2～3个柱体积。更佳的预处理步骤如下：将含1N盐酸的70％丙酮水溶液冲洗树脂，用量为3BV，再用去离子水洗到中性。

本发明中，所述的银杏叶粗提物可为本领域常规的经过溶剂提取和/或萃取等方法而制得的银杏叶粗提物。本发明中，所述的银杏叶粗提物可为醇提和/或酯溶剂萃取所得的粗提物，其中所述的醇可为乙醇，酯可为乙酸乙酯。

较佳的，所述的银杏叶粗提物可由下列方法制得：

(1)将银杏叶用乙醇水溶液浸泡提取后离心，取上清液；

(2)将步骤(1)所得物质用乙酸乙酯萃取。

步骤(1)中，所述的银杏叶较佳的为干银杏叶。在浸泡提取前较佳的先将银杏叶用水洗，水洗的次数较佳的为1次。所述的乙醇水溶液的体积浓度较佳的为40～80％，更佳的为60～70％。每次提取所用的乙醇水溶液与银杏叶的体积质量比较佳的为3～8L/Kg，更佳的为5L/Kg。所述的每次浸泡的时间较佳的为1～3小时，更佳的为2小时。浸泡的温度较佳的为60～80℃。所述的浸泡提取以及离心的次数较佳的为1～3次，更佳的为2次。得到上清液后，较佳的再进行浓缩除去乙醇，得浓缩液。