[发明专利]生物素-亲和素系统检测单核苷酸多态性的方法

权利要求书

1.一种生物素-亲和素系统检测单核苷酸多态性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

第一步，利用DNA折纸术构造一个非对称二维图形，制备DNA折纸芯片；

第二步，末端修饰生物素的报告探针与DNA折纸芯片杂交；

第三步，链霉亲和素与生物素连接；

第四步，单核苷酸多态性检测；

第五步，原子力显微镜成像。

2.根据权利要求1所述的生物素-亲和素系统检测单核苷酸多态性的方法，其特征是，第一步中所述的DNA折纸芯片的制备方法：

(1)把所有要用的100μM订书钉链，包括形成非对称二维图形的、伸出探针的等体积混合，再稀释20倍备用；

(2)在96孔板上混合总量为30μl的溶液：0.025μM订书钉链：22μl；1/2浓度的M13mp18：1μl；1×TAE-Mg2+buffer：7μl。

3.根据权利要求1所述的生物素-亲和素系统检测单核苷酸多态性的方法，其特征是，第二步中所述的杂交的方法是指报告探针比捕获探针按摩尔浓度比1.2比1的比例加入略微过量的报告探针，37℃杂交半小时。

4.根据权利要求1所述的生物素-亲和素系统检测单核苷酸多态性的方法，其特征是，第三步所述的连接是指链霉亲和素∶生物素按摩尔浓度比1.2比1的比例加入略微过量的链霉亲和素，37℃反应一小时。

5.根据权利要求1所述的生物素-亲和素系统检测单核苷酸多态性的方法，其特征是，第四步所述的检测是指在原子力显微镜成像前，加入报告探针摩尔浓度2倍量的靶核苷酸链，取加前、加后15分钟、加后1小时，加后3小时的时间点原子力显微镜成像。

6.根据权利要求1所述的生物素-亲和素系统检测单核苷酸多态性的方法，其特征是，第五步所述的成像是指吸取2-5μl样品滴到新切云母表面，吸附2分钟后即可拿到原子力显微镜下成像。

7.根据权利要求6所述的生物素-亲和素系统检测单核苷酸多态性的方法，其特征是，所述的原子力显微镜成像，原本都是有亮点的，在某一时间后，完全互补的已没有亮点，根据分支迁移反应机制，加入两种toehold长短不同靶核苷酸链，单碱基突变的仍有明显亮点。