[发明专利]编码白细胞介素-12的重组火鸡疱疹病毒

说明书

本发明涉及在HVT基因组中含有异源核酸序列的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。

重组HVT例如是从EP431668已知的。HVT是公知的马立克氏病病毒(MDV)并且广泛用于安全疫苗中，用于有效控制家禽中的马立克氏病(MD)。重组HVT，其也是公知的并且用于对抗马立克氏病，例如，通过引入编码一个或多个所述其他病原体的抗原的异源基因给予了另外提供对抗其他病原体的保护的可能性。此外，重组HVT可以是包含来自另一个马立克氏病病毒血清型的基因的HVT。这样的重组HVT例如在US 5,965,138中有描述，并且也称为重组嵌合病毒或新的禽疱疹病毒。

从现有技术，已知多种方法来获得含有引入到HVT基因组中的异源核酸序列的重组HVT载体。例如，在US 5,965,138(’138专利)中，公开了将外源DNA引入到唯一的长病毒区域的非必需区域中，该长病毒区域是火鸡疱疹病毒中天然存在的基因组的一部分。迄今为止，通常的一般知识是将异源核酸与功能性启动子，例如，HVT中天然存在的启动子或异源启动子可操作地连接，使得异源DNA在宿主中得到真正的表达。这样的方法从上述的’138专利是已知的，但也可以例如从以下文献中获知：Sondermeijer等(在：Vaccine，1993；11(3)：349-58)，Djeraba等(在：Journal of Virology，2002年2月，p.1062-1070)和Mohr等(在：International Journal of Medical Microbiology 298，2008，115-125)。在欧洲专利431668中，描述了异源核酸序列可以源自任何病原体，优选禽病原体，在插入HVT基因组后，其可以用于诱发对抗由该病原体引起的疾病或障碍的免疫力。这样的病原体例如可以是传染性支气管炎病毒(IBV)、新城鸡瘟病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡贫血因子(CAA)、Reo病毒、禽逆转录病毒、禽腺病毒、火鸡鼻气管炎病毒、艾美虫属种、沙门氏菌属种、大肠杆菌、鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisepticum)和滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae)、鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale)、弯曲杆菌(Campylobacter)等。

然而，已知重组HVT具有缺点。对于每种疫苗，接着对抗马立克氏病的保护，必需提供对抗另一种疾病或障碍的保护，因此一个疫苗必须插入诱发其他疾病或障碍的病原体的异源核酸序列(从现在开始，术语“障碍”也将用于涵盖“疾病”)。这从经济学的观点看是没有吸引力的，并且还降低了在疫苗中使用重组HVT的安全性。

本发明的目的是克服或至少减轻上述的缺点。为此，已经设计了根据序言的重组HVT，其中异源核酸编码IL-12蛋白，将其用于制造保护禽类对抗马立克氏病病毒并降低其对微生物感染的敏感性的药物。

令申请人惊讶的是通过给药编码IL-12的HVT载体可以降低禽类对微生物感染的敏感性(即，马立克氏病病毒感染以外的感染，对马立克氏病病毒HVT自身已经提供了保护)，而不需要给药源自相应微生物的抗原。实际上，通常从文献中获知IL-12在对抗微生物(即，如细菌、病毒或寄生物的微生物)感染的免疫应答中起作用。还知道缺乏IL-12(即，不能产生IL-12)的哺乳动物在接受病原体时具有不太有效的免疫应答，并且通过直接给予外源IL-12可以使其达到正常水平。然而，现在显示出在健康的禽类中(即，不是IL-12缺乏的)，可以使得禽类对任何微生物的感染不太敏感，而不需要同时(或无论如何，在实际感染野生型微生物发生之前)必须给予源自该微生物的抗原，即使在没有同样给予IL-12时，而是给予通过HVT载体表达的DNA形式。这可以获得非常方便和廉价的降低禽类对马立克氏病病毒以外的微生物感染的敏感性的方法(注意到表达的IL-12也可以增强对抗马立克氏病的保护)。此外，该药物是非常安全的，因为它不需要含有除HVT自身以外的任何其他的抗原材料，因此可以完全防止不同抗原组合的不利相互干扰的风险。然而，如果希望，该药物可以含有其他抗原材料。当希望获得对抗多种MDV的最佳保护时，这种附加材料例如可以是源自其他马立克氏病病毒(MDV)的材料，乃至源自非-MDV微生物。