[发明专利]柏树木层孔菌菌株及其子实体培养方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一个柏树木层孔菌菌株及其子实体培养方法，属于药用真菌资源的开发与利用技术领域。本菌株是一种新发现的药用真菌。

(二)背景技术

柏树木层孔菌(Phellinus sp.)是中国发现的一个真菌新记录物种，是一种药用真菌，子实体和菌丝体内含有多糖、三萜类化合物，具有抗菌和抗癌的功效。充分开发利用我国丰富宝贵的珍稀药用真菌资源，有利于实现药用真菌的市场开发，对人类健康和社会经济的可持续发展有重要的应用前景和意义。

(三)发明内容

1.发明目的本发明的目的是提供一种柏树木层孔菌药用菌菌株及其子实体培养方法，生产该药用真菌子实体，为中国珍稀野生药用菌的大规模市场开发利用服务。

2.技术方案

柏树木层孔菌药用菌菌株，拉丁学名：Phellinus sp.。该菌种已于2007年1月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏编号CGMCCNO：1932，原始编号是：200608241。在四川卧龙自然保护区采集到原始标本，寄主植物为：柏树(树龄800～1000年)，通过菌肉组织分离得到纯菌种，在培养基上培养而获得，其特征是：

(a)形态特征

柏树木层孔菌新菌株在PDA培养基上生长十分缓慢，生长速度为2～3mm/d，在松针蛋白胨葡萄糖酵母粉培养基上生长速度为3～4mm/d。菌落圆形，致密，黄白色，边缘不整齐，气生菌丝不发达，菌丝体贴在培养基表面生长。子实体群生、单生、迭生于活的柏树树干表面，多年生。单个菌盖10～20×20～30×10～20cm，半圆形或椭圆形，表面黑褐色，边缘黄色或黄褐色、黄白色，有同心圆环带，表面不均匀。菌肉黄褐色，木质，3～5层，横切面三角形，厚度为5～10cm。菌管多层，长度10～15cm，黄褐色，下表面黄色，光滑无突起。菌孔密生，椭圆形，2～4个/mm。孢子印黄色。孢子近圆形、方椭圆形，光滑，黄色，中有一球状物，6.5～8.5μm×4.5～5.5μm。菌丝体系统2型，有锁状联合，生殖菌丝直径2.5μm，联络菌丝1.0μm～1.5μm。

(b)生理特征

柏树木层孔菌菌丝生长的温度范围是3～35℃，最适温度25～28℃；子实体分化的温度范围10～25℃，最适温度15～25℃；0～10℃的温差昼夜刺激有利于子实体的分化；孢子萌发的温度范围是10-30℃，最适温度25℃；菌丝能在pH 3～10范围内生长，最适pH4.5～5.5。

(c)营养需求

碳源、氮源的种类及碳氮比对柏树木层孔菌菌丝生长、子实体分化与发育有显著影响。该菌能利用纤维素、木质素、淀粉、葡萄糖、蔗糖、果糖、玉米粉、乳糖和甘露糖作碳源，其中葡萄糖和蔗糖为碳源生长势强，果糖生长势弱；蛋白胨、硫酸铵、硝酸铵、尿素、黄豆粉、玉米粉和麦麸均可作为氮源，在麦麸上生长速度快，长势旺盛；硫酸铵、硝酸铵和尿素虽能作为氮源，长势很弱；能在C/N＝10/1～45/1的范围内生长，C/N为25/1～30/1时生长速度最快。在完全黑暗的条件下不能形成子实体，需要一定强度的散射光照射才能形成子实体，子实体生长允许阳光直射。

(d)栽培条件

栽培原料可以使用柏树木屑、阔叶树木屑、棉籽壳、麸皮、米糠、玉米粉等，培养料含水量60％～63％，pH为5～6。栽培季节为3～10月，出菇温度不超过28℃，空气相对湿度为70％～90％。培养料必须经过高压(0.1MPa，1～1.5h)或常压灭菌(100℃，8～10h)。栽培方式为瓶栽或袋栽。

(四)说明书附图

图1柏树木层孔菌子实体表面和横切面(左：子实体表面，右：横切面)

(五)具体实施方式

(a)菌丝体培养方法

本发明采用的琼脂培养基配方：

(1)柏树汁葡萄糖蛋白胨培养基：柏树树叶或树枝50～100g，葡萄糖20g，蛋白胨2～4g，琼脂20g，水1000mL，pH自然。

(2)松针汁葡萄糖蛋白胨培养基：松针50～100g，葡萄糖20g，蛋白胨2～3g，琼脂20g，水1000mL，pH自然。

(3)PDA加富培养基：马铃薯200g，蔗糖20g，蛋白胨3～5g，酵母粉2g，琼脂20g，水1000mL，pH自然。

液体培养基：上述配方中不添加琼脂。