[发明专利]色素万寿菊的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物技术领域的组织培养方法，具体是一种色素万寿菊的组 织培养方法。

背景技术

万寿菊(Tagetes erecta)又名臭芙蓉，为菊科万寿菊属的一种，原产墨西哥 及美洲地区，现世界各地均有栽培。按用途可将其分为观赏万寿菊和色素万寿菊， 色素万寿菊花瓣内叶黄素含量极其丰富，是提取天然叶黄素的理想原料，叶黄素 可广泛用于食品着色、医药及禽类饲料中，具有很高的经济价值。

近年来，国外万寿菊品种选育方面取得了长足的进展，而我国F1代万寿菊育 种尚处于起步阶段，一些涉及F1制种技术如播种技术、育苗技术、亲本识别方 法、授粉方法、父本和母本播种比例、种子采收时间及栽培范围等虽已有报道， 但培育出与国外品种有竞争力的自主产权的品种还需时日，而通过常规的繁殖方 法如种子繁殖，则后代易发生变异；插扦繁殖则耗时长，短时期无论法获得大量 种苗。我国被认为是目前世界上最大的万寿菊潜在消费市场，对色素万寿菊种子 的需求量大，除了加强制种技术的研制外，寻找及建立一种色素万寿菊的快速繁 殖方法已成当务之急，采用组织培养法对具有优良品种特性的万寿菊进行快速繁 殖，在短期内生产出大量整齐均匀的健壮种苗，建立一个高效的植株再生体系， 有利于种质资源的保存和优良品种的推广，同时也为基因工程育种奠定了基础。

经对现有技术的文献检索发现，

邹永梅、黄雪芳在《江苏林业科技》2005年32卷6期17～19页发表了题 为“万寿菊的组织培养和瓶苗开花研究”；苏福才、钱国珍在《内蒙古农牧业学 院学报》1999年20卷3期第108～111页发表了“万寿菊茎段组织培养”。但 两学者所选取的外植体均为茎段，其取材范围较窄；

Marilyn M.Belarmino等在《.Japan.J.Breed》(日本育种杂志)1992 年42期第835～841页发表了“Callus induction and plant regeneration in African Marigold(Tagetes erecta L.)”(非洲万寿菊愈伤诱导与植物再生)一 文，该学者利用万寿菊胚轴、叶片为外植体诱导植株再生，但利用叶片建立万寿 菊再生体系未能成功；

Pratibha Misra等在《In Vitro Cellular & Developmental Biology》(离 体分子发育生物学)2001年10期466发表了“Direct differentiation of shoot buds in leaf segments of white marigold(Tagetes erecta L).”(白花万寿 菊叶片直接诱导芽分化)一文，文中提到，利用白花万寿菊叶片为外植体诱导了 植株再生，但可能由于品种基因型的差异，从预备试验结果看，其结果不适宜用 于F1色素万寿菊植株再生；

Pablo E，Vanegas等在《Plant Cell Tissue and Organ Culture》(植物 细胞组织与器官培养)2002年69期第279～283页发表了“Plant regeneration via organogenesis in marigold”(通过器官发生万寿菊实现植株再生)一文， 文中提到，利用万寿菊叶片为外植体建立了再生体系，但是存在着不定芽诱导率 低的缺点(69.3％)，同时还发现在其条件下诱导植株再生，不定芽还存在着玻璃 化的倾向，不能发育成正常苗。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种色素万寿菊的组织培养方 法。本发明的方法取材方便、可提供的材料充足，可高频率地诱导出大量的万寿 菊再生芽，再生植株成活率高，最高可达100％，而且具有再生植株变异小和遗 传稳定性较高的优点；本发明为扩大万寿菊的繁殖系数、种质保存及其遗传转化 奠定了良好的基础。

本发明是通过以下技术方案实现的，包括如下步骤：

步骤一，取万寿菊叶片，灭菌后诱导；诱导使用的分化培养基具体为MS基 本培养基，添加剂为：3mg/L的6-BA，3mg/L的IAA，30g/L的蔗糖，6g/L的植 物凝胶；培养条件为：温度23～27℃，光照时间10h～20h/d，光照强度2000～ 3000lux，不定芽的诱导时间为9～14d；