[发明专利]军团菌选择性分离培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种培养基，具体是一种适合对环境和临床标本中军团菌的分离培养，可减少杂菌污染、提高军团菌分离培养阳性率的军团菌选择性分离培养基。

背景技术

目前，国内外公认的军团菌分离培养基是法国生物梅里埃(bioMérieux)、英国OXOID、美国BD、DIFCO公司等生产的BCYEα-CCVC、BCYEα-GVPC和BCYEα-GPVA等^[1]，这些培养基大多价格昂贵(18～25元/1个平皿)，在医院临床和卫生防疫部门大量应用时，检测成本高，且对军团菌分离培养阳性率一般为35.1％～65.0％^[2-3]，阳性率比较低。因此现有的军团菌分离培养基不利于临床和卫生防疫部门推广应用。

发明内容

本发明的目的是针对以上所述军团菌分离培养基存在的不足，提供一种成本低、分离培养阳性率偏高的军团菌选择性分离培养基。

本发明是这样实现的：军团菌选择性分离培养基，其包括的组份重量份数如下：

基础液：

蛋白液：

甘氨酸    2.5～3.5

L-半胱氨酸0.3～0.8

白蛋白    0.05～0.15

染料液：

溴甲酚紫  0.005～0.02

溴酚蓝    0.005～0.02

抗生素液：

万古霉素  0.0005～0.002

多粘菌素B 0.006～0.010

放线菌酮  0.006～0.010

制备步骤如下：

(1)基础液中的酵母粉、琼脂、碳粉、ACES和a-酮戊二酸按上述重量份数称量放置容器中，加水900～1000份，用KOH将pH值调至6.85；煮沸1分钟，然后再121℃高温灭菌15分钟；将焦磷酸铁溶于8～12份水中，过滤灭菌；将121℃高温灭菌后的酵母粉、琼脂、碳粉、ACES和a-酮戊二酸冷却至55℃后加入过滤灭菌的焦磷酸铁溶液混匀；

(2)将甘氨酸、L-半胱氨酸和白蛋白按上述重量份数称量放置容器中加入27～31份水进行溶解；

(3)将溴甲酚紫和溴酚蓝按上述重量份数称量放置容器中加入8～12份乙醇中进行溶解；

(4)将万古霉素、多粘菌素B和放线菌酮按上述重量份数称量放置容器中加入0.8～1.2份水中进行溶解；

(5)将(1)步骤的溶液加入(2)步骤得到的溶液中，所得到的混合液再加入(3)步骤得到的溶液中，最后将所得到的混合液加入(4)步骤所得到的溶液中混匀。

本发明在包括以酵母粉、活性炭、琼脂、ACES(N-2-乙酰氨基-2-氨基乙烷磺酸)缓冲剂、α-酮戊二酸、可溶性焦磷酸铁以及L-半胱氨酸等军团菌生长所必需的营养成分的基础配方上，添加染料溴麝香草酚蓝和溴甲酚紫，在对军团菌进行选择性分离培养的同时可以使菌落显色，根据菌落形态和颜色鉴定和区分军团菌目标菌；添加选择性抗生素可抑制非军团菌属细菌如革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌和霉菌类生长，从而提高军团菌分离培养阳性率。

与现有技术相比，本发明军团菌选择性分离培养基有益效果是：(1)添加的染料使军团菌生长过程中产生色素，根据菌落形态和颜色有利于鉴定和区分军团菌目标菌；(2)添加和调整选择性抗生素浓度，提高对非军团菌属及杂菌类的抑制能力，降低对军团菌种的抑制性，从而提高了对军团菌属分离培养阳性率；(3)降低检测成本、经济实用，便于临床和卫生防疫部门推广应用。

附图说明

图1是空白培养基的图。

图2是四区划线法接种军团菌ATCC33153标准菌株，培养72小时后的图片。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施例进行详细说明。

实施例1

军团菌选择性分离培养基，其包括的组份重量份数如下：

基础液：

蛋白液：

甘氨酸    2.8～3.2

L-半胱氨酸0.4～0.6

白蛋白    0.08～0.12

染料液：

溴甲酚紫  0.008～0.012

溴酚蓝    0.008～0.012

抗生素液：

万古霉素  0.0008～0.0012

多粘菌素B 0.0070.009

放线菌酮  0.007～0.009

制备步骤如下：