[发明专利]用于多糖的定性与定量分析方法

权利要求书

1.一种用于多糖的定性与定量分析方法，其特征在于，步骤如下：

(1)、多糖的酶解及验证：多糖水溶液以比色法测定含量，调节糖含量， 平行准备若干份多糖溶液，分别加入适量糖苷酶进行酶解，每个酶解反应重 复3～5次；

(2)、多糖酶解分析：多糖水溶液及其酶解物经HPSEC-ELSD分析，比 较酶解前、后多糖图谱的变化；多糖图谱酶解前、后未发生明显变化记为阴 性(-)响应；图谱中有特征峰的消失、减小，或者新色谱峰的出现则记为 阳性(+)响应；

(3)、糖谱分析：多糖酶解液中酶解残留片段和/或生成的寡糖及单糖，用 HPLC-ELSD直接分析获得糖谱；或通过柱前衍生化，改善糖类成分在色谱 柱上的分离效果和紫外吸收特性，提高紫外检测和质谱检测的灵敏度，进而 提高定性、定量的准确性；以标准单糖、糖醛酸、双糖为对照和以色谱峰质 荷比为参比，进行糖谱色谱峰识别；糖谱中稳定的特征片段，则用作定量分 析指标；

(4)、通过上述步骤中的(1)和(2)；(1)和(3)；或(1)、(2)和(3)联合应用，构建 基于结构信息的多糖酶解响应特征和多糖酶解糖谱，实现对多糖的定性、定 量分析。

2.根据权利要求1所述的用于多糖的定性与定量分析方法，其特征在 于，步骤(1)中所述的“以比色法测定含量”和“加入适量糖苷酶进行酶解” 是指：苯酚-硫酸法或蒽酮-硫酸法比色反应测定含量，以及使用包括阿拉伯 聚糖内切酶、木聚糖酶、1，4-β-D-半乳聚糖内切酶、纤维素酶、果胶酶、a- 淀粉酶、异淀粉酶、1，3-β-葡聚糖内切酶、昆布多糖酶、β-甘露聚糖酶、1，3(4)-β- 葡聚糖内切酶、透明质酸酶和右旋糖酐酶中任意两个或两个以上的组合对多 糖进行酶解，每1mg多糖所使用的酶的用量范围为3U～650U。

3.根据权利要求1所述的用于多糖的定性与定量分析方法，其特征在 于，步骤(3)中所述的糖谱分析是指：采用HPLC-ELSD直接分析上述多糖酶 解物，或将上述酶解物经衍生化后，用HPLC-DAD-ELSD或 HPLC-DAD-MS/MS分析，获得多糖酶解产物特征图谱一糖谱，以此定性鉴 别多糖；以多糖酶解的特征片段为指标，选择适当的多糖或寡糖为对照品， 实现针对多糖结构特征的定量分析。

4.根据权利要求3所述的用于多糖的定性与定量分析方法，其特征在 于，步骤(3)中所述的酶解物的衍生化是指：还原胺化、与吡唑啉酮类、肼类 试剂反应、氨基衍生化、羟基衍生化、羧基衍生化。

5.根据权利要求3所述的用于多糖的定性与定量分析方法，其特征在 于，所述的“选择适当的多糖或寡糖”：是选自：标准葡聚糖、普鲁蓝多糖、 纤维三糖至纤维六糖、葡萄三糖至六糖的寡糖、麦芽糖、纤维二糖、半乳二 糖，或葡萄糖、半乳糖、甘露糖中任一化合物或纯化的酶解特征片段为对照 品，实现针对多糖结构特征的定量分析。