[发明专利]一种制备基因工程N-乙酰化胸腺素α1的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备基因工程N-乙酰化胸腺素α1的方法。

背景技术

胸腺素α是一族具有相同或相似N-端序列的免疫调节多肽，包括胸腺素α原、胸腺素 α1和胸腺素α11等。其中，胸腺素α1和胸腺素α11是胸腺素α原在体内降解的产物。天 然来源的胸腺素α的N-端都具有N-乙酰化修饰，N-乙酰化修饰对胸腺素α1的体内稳定性 具有重要作用。采用化学方法合成的N-乙酰化胸腺素α1已经上市，商品名为“日达仙”， 用于治疗病毒性肝炎等，疗效显著。但是采用化学方法合成N-乙酰化胸腺素α1成本高、 污染大，制约了该药的广泛使用。利用基因工程大肠杆菌制备多肽具有成本低、安全性好、 适合于规模化生产等优势，但利用大肠杆菌生产的多肽一般没有N-乙酰化修饰，因此目前 已经报道的基因工程方法制备的胸腺素α1均为非乙酰化的。目前已发现用基因工程大肠 杆菌可以制备N-乙酰化胸腺素α原(Wu J，Chang S，Gong X，Liu D，Ma.Q.Identification of N-terminal acetylation of recombinant human prothymosin alpha in Escherichia coli.Biochim Biophys Acta.2006；1760(8)：1241-7.)，并发现将N-乙酰化胸腺素α原通过羟胺切割可以获 得N-乙酰化胸腺素α1的类似物，但该N-乙酰化胸腺素α1类似物的C-端为羟胺化修饰的， 与天然的N-乙酰化胸腺素α1的游离羧基端不同，这种不同，在N-乙酰化胸腺素α1作为药 物时可能造成具有免疫原性、影响生物活性等问题。

由于胸腺素α原具促进正常细胞转化和异常增生的作用，因此具有潜在的致瘤性 (Rodriguez P，Vinnuela JE.Overexpression of prothymosin α accelerates proliferation and retards differentiation in HL-60cells.Biochem J，1998，331：753-761.)，这种致瘤性是由胸腺 素α原C端的核定位序列(TKKQKTDEDD)介导的，缺失或替换该C端核定位序列后，胸腺素 α原就不再具有致瘤性(Freire J，Covelo G，Sarandeses C，et al.Identification of nuclear-import and cell-cycle regulatory proteins that bind to prothymosin alpha.Biochem Cell Biol，2001，79：123-31；Steven A，Enkemann，RH Wang.Functional Discontinuities in Prothymosin α Caused by Caspase Cleavage in Apoptotic Cells.Journal of Cellular Physiology， 2000，182：256-68)。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备基因工程N-乙酰化胸腺素α1的方法。

本发明所提供的制备N-乙酰化胸腺素α1的方法，包括以下步骤：

1)用基因工程大肠杆菌制备含N-乙酰化胸腺素α1多肽序列的前体蛋白或多肽；

2)内肽酶酶切上述步骤1)的含N-乙酰化胸腺素α1多肽序列的前体蛋白或多 肽，纯化得到N-乙酰化胸腺素α1。

上述方法中，所述含N-乙酰化胸腺素α1多肽序列的前体蛋白或多肽可以是含N-乙酰 化胸腺素α1多肽序列的融合蛋白或多肽，也可以是含N-乙酰化胸腺素α1序列的N-乙酰化 胸腺素α原或其突变体。