[发明专利]一种检测肠病毒的快速检测试纸及其制造方法

权利要求书

1.一种检测肠病毒的快速检测试纸，其包含背板、吸水板、样品吸液层、硝酸纤维素膜、颜色颗粒 储藏垫，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上设有至少一条单克隆抗体检测线和多克隆抗体控制线， 颜色颗粒储藏垫中含有单克隆抗体包附的颜色颗粒；上述单克隆抗体选自下列中的至少一种：

EV71病毒单克隆抗体；

Cox A16病毒单克隆抗体；

并且所述颜色颗粒是胶体金颗粒或乳胶颗粒，其中所述胶体金颗粒的颗粒直径为纳米级，所述乳 胶颗粒的颗粒直径为0.01～10μm。

2.权利要求1中所述检测肠病毒的快速检测试纸，其特征在于：所述颜色颗粒储藏垫中含有EV71病 毒单克隆抗体和Cox A16病毒单克隆抗体混合包附的颜色颗粒。

3.权利要求2中所述检测肠病毒的快速检测试纸，其持征在于：所述硝酸纤维素膜上设有两条检测 线，其中一条为EV71病毒单克隆抗体喷涂的检测线，另一条为Cox A16病毒单克隆抗体喷涂的 检测线。

4.权利要求2中所述检测肠病毒的快速检测试纸，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上设有一条由EV71 病毒单克隆抗体和Cox A16病毒单克隆抗体混合喷涂的检测线。

5.一种制备权利要求1中所述检测肠病毒的快速检测试纸的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）单克隆抗体的制备：SP2/0骨髓瘤细胞与抗原免疫过的小鼠脾淋巴细胞融合，形成杂交瘤细胞， 经过筛选后，分别获得两株能够产生高纯度、配对的EV71病毒单克隆抗体的细胞株和两株能 够产生高纯度、配对的Cox A16病毒单克隆抗体的细胞株；

（2）用颜色颗粒标记单克隆抗体，其中：

采用胶体金标记抗体，其制备方法是：用0.2mol/L K₂CO₃调至胶体金pH至8.5，搅拌下加入 纯化的EV71病毒单克隆抗体或Cox A16病毒单克隆抗体1-3mg/100ml胶体金，然后加入牛 血清蛋白250mg，搅拌后加入NaCl，使其浓度为1%，摇匀后离心，将沉淀溶于储存液中备 用；或者

采用乳胶颗粒标记抗体，其制备方法是：取乳胶溶液100μl，加入硼砂缓冲液900μl，离心后 去上清，用硼砂缓冲液洗涤、离心、去上清后，再加入硼砂缓冲液悬浮沉淀，加入EV71病毒 单克隆抗体或Cox A16病毒单克隆抗体20μg，体积定容至1ml，再向所得溶液中加入10μl 15mg/ml的EDC，孕育4小时后离心，弃上清，用5%BSA悬浮沉淀，封闭过夜；

（3）膜的制备：将上述步骤（1）中制备的另一株EV71病毒单克隆抗体或Cox A16病毒单克隆抗 体用0.01M PBS稀释成3.5mg/ml，用喷膜机将以上抗体以1μl/cm的速度喷于硝酸纤维素膜上， 形成检测线；将多克隆抗体稀释成2mg/ml，用喷膜机以1μl/cm的速度喷于硝酸纤维素膜上， 形成控制线；将膜晾干后，在25-37℃封闭液中浸泡60分钟，取出后充分干燥，备用；

（4）将步骤（2）中制备的颜色颗粒标记抗体涂覆到玻璃纤维膜上，形成颜色颗粒储藏垫；

（5）在底板上顺次相互搭接的粘贴样品吸液层、颜色颗粒储藏垫、硝酸纤维素膜、吸水板。