[发明专利]用于水果保鲜和大棚蔬菜生产的枯草芽孢杆菌菌剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于水果保鲜和大棚蔬菜生产的枯草芽孢杆菌菌剂，属于微生物应用技术领域。

背景技术

引起水果腐烂、变质和大棚蔬菜病害的病原菌多为病原真菌。半个多世纪以来，化学杀菌剂在水果保鲜和大棚蔬菜生产领域里起了十分重要的作用。但是，随着化学杀菌剂的长期和大量使用带来的农药残留、环境污染、病原真菌抗药性等问题的出现，化学杀菌剂的安全性引起了社会的普遍关注，开发生物杀菌剂越来越受到人们的重视。特别是寻找那些对人畜安全，无毒害，不污染环境等优点的生物杀菌剂已成为研究热点。目前研究证实具有较好开发前景的微生物包括：芽孢杆菌、木霉、放线菌等，其中以枯草芽孢杆菌的研究开发最为活跃，在微生物杀菌剂市场中备受瞩目。枯草芽孢杆菌是一种在自然界广泛存在的微生物，革兰氏阳性，产生耐热、抗逆的芽孢，在芽孢形成初期分泌各种抗菌物质，对病原真菌有特异性的防治作用，具有显著的生防潜力。枯草芽孢杆菌具生长快、营养简单，有利于生防菌剂的生产、剂型加工及在环境中的存活、定殖与繁殖，而且批量生产工艺简单，成本也较低，施用方便，储存期长，是一种理想的生防微生物。尽管很多枯草芽孢杆菌生防制剂已被证实具有防治作用，但仅有少数几种应用于生产，大部分仍处于研究和探索阶段。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于水果保鲜和大棚蔬菜生产的枯草芽孢杆菌菌剂，替代目前使用的化学保鲜剂和杀菌剂，可延长水果的保鲜期并有利于绿色无公害蔬菜的生产。

本发明的目的还在于提供一种用于水果保鲜和大棚蔬菜生产的枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法。

实现本发明的目的采取的技术方案是这样的：本发明人从田间玉米病叶片上分离到一株对玉米小斑病菌C小种有拮抗作用的细菌。采用平板对峙法测定了该菌株对致病真菌的拮抗作用，所测的病原真菌，包括玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.Vasinfectum)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici)、辣椒疫霉病菌(phytophora capsici)、黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum lagenarium)、大蒜菌核病菌(Sclerotinia allii)、棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata)等。结果表明，该菌株对上述病原真菌均有一定的抑制作用，说明其具有广谱抗病原真菌特性。通过菌体革兰氏染色、菌落形态特征的观察、生理生化测试及16S rDNA序列分析结果，菌株CGMCCNo.1982符合枯草芽孢杆菌特征，因此将其鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。采用紫外线和氯化锂对菌株CGMCC No.1982进行复合诱变处理，获得了遗传性状稳定的诱变菌株，其对致病真菌玉米小斑病菌的拮抗活性比出发菌株提高了66.2％。该菌株可分泌蛋白性质的拮抗物质，拮抗物质可使玉米小斑病菌孢子不萌发或萌发异常；菌丝畸形，顶端及中部膨大、扭曲，细胞质分布不均匀。菌株的大白鼠急性毒性实验表明，菌株微毒性，符合生物制剂要求。

本发明所说的用于水果保鲜和大棚蔬菜生产的枯草芽孢杆菌菌剂的有效成分为枯草芽孢杆菌CGMCC No.1982湿菌体，所说的菌剂剂型可以是干粉、水悬浮剂、可湿粉剂、泡腾颗粒或片剂的单剂，其中芽孢含量为200亿～500亿/克。

用于水果保鲜和大棚蔬菜生产的枯草芽孢杆菌干粉菌剂含有碳酸钙成分，湿菌体与碳酸钙的质量比为1∶1，干粉菌剂中活芽孢数为(2.109±0.366～5.12±0.135)×10¹¹cfu/g。

用于水果保鲜和大棚蔬菜生产的枯草芽孢杆菌水悬浮剂各组分的质量百分比为：

湿菌体            0.1％

Tersperse 2500    1％-10％

黄原胶             1％-5％

可溶性甲壳质       0.1％-2％

苯甲酸钠           0.2％-2％

水                 余量

pH                 4-7。

用于水果保鲜和大棚蔬菜生产的枯草芽孢杆菌可湿粉剂各组分的质量百分比为：

湿菌体             1％

十二烷基苯磺酸钠   0.1％-10％

黄原胶             1％-5％