[发明专利]一种抗癌药物及其制备方法

说明书

本发明涉及抗癌药物技术领域，属于中药二类，具体是指一种以怀牛膝皂甙为活性成分的抗癌免疫调节药物及其制备方法。

在临床治疗恶性肿瘤时，一些用于化疗的药物如长春新碱、足叶乙甙等常常引起患者免疫力低下，并产生较大的毒性，限制了癌症患者的进一步治疗。怀牛膝是著名的“四大怀药”之一，在民间抗恶性肿瘤中药组方中是一味常用中药，而且毒性低。例如，上海中医学院公开的复方：“生黄芪、穿山甲、土茯苓、白花蛇舌草各15克，潞党参、仙灵脾、杞子、怀牛膝、七叶一支花、杭白芍各12克，炒黄柏10克，甜苁蓉、巴戟天、制大黄、知母、炙甘草各6克”水熬剂用于治疗前列腺癌(参见《抗癌中草药大辞典》第52页，刘春安主编，湖北科学技术出版社，1994年3月第1版)；湖北中医学院公开的复方：“白花蛇舌草、蜂蜜各60克，紫花地丁、白茅根、蒲公英各30克，金银花、忍冬藤、海藻、昆布、干生地、玄参各15克，怀牛膝、天葵子、连翘各10克，细辛1.5克”水熬剂用于治疗舌癌(参见《抗癌中草药大辞典》第52页，刘春安主编，湖北科学技术出版社，1994年3月第1版)等，但怀牛膝在这些抗癌复方中的作用机理迄今不明。近年来的药理研究表明(参见《中草药》第17页，朱和等著，1987年第18卷第4期)，从怀牛膝根部分离得到的怀牛膝皂甙具有抗生育及强心活性，但未见研究其抗癌免疫调节活性。

本发明的目的就是为了克服现有技术中存在的缺陷，提供一种高效低毒、能够提高机体免疫力的以怀牛膝皂甙为活性成分的抗癌免疫调节药物及其制备方法。

本发明的一种抗癌药物是以怀牛膝皂甙为主要成分，得率3～3.5％。

本发明的一种抗癌药物，经薄层层析及酸水解可以表明，其怀牛膝皂甙是以齐墩果酸及葡萄糖醛酸为甙元的三萜皂甙，纯度为80％以上。

本发明提供的一种抗癌药物的制备方法包括如下步骤：

步骤一：怀牛膝粗皂甙的提取

将怀牛膝根在体积百分比为50～80％的甲醇或者乙醇水溶液中热回流提取1～10次，回收溶剂，得到甲醇或者乙醇浸膏，再将浸膏溶解于纯水中，脱脂萃取1～10次，得到水层萃取部分和脱脂萃取部分，将水层萃取部分用正丁醇继续萃取1～10次，得到正丁醇萃取部分，回收正丁醇萃取部分，即得怀牛膝粗皂甙；

步骤二：怀牛膝皂甙的纯化

将怀牛膝粗皂甙在体积比为0～100∶100～0的甲醇或者乙醇∶水的洗脱液中洗脱，层析后即得怀牛膝皂甙；

步骤三：干燥

怀牛膝皂甙干燥后即得本发明的一种抗癌药物。

为了更好地实施本发明，脱脂萃取可以采用氯仿、乙酸乙酯、乙醚、石油醚。

药理试验表明，本发明提供的以怀牛膝皂甙为活性成分的抗癌免疫调节药物具有下述理化、生物性质及生物活性：

1．体外抑制小鼠EAC瘤细胞试验：取接种后第7天的荷EAC小鼠腹水细胞悬于含体积分数比10％小牛血清的RPMI-1640培养液中，瘤细胞浓度为2.5×10⁵/ml，在培养48小时后，该药物在10～100μg/ml浓度时，对EAC瘤细胞具有明显的细胞毒作用，蓝染率为34～100％。

2．体内抑制小鼠S180A及肝癌实体试验：无菌条件下抽取荷瘤昆明小鼠腹水，用无菌生理盐水调整肿瘤细胞数至2.5×10⁷/ml，混匀后，每鼠右腋皮下分别注射S180A或者0.2ml，小鼠接种2天后开始灌胃用药观察，连续7天，第8天处死小鼠后取瘤组织称重，计算抑瘤率为43％，表明该药物对小鼠体内的肉瘤S180A具有较强的抑制作用，对Heps的生长也具有一定的抑制作用。

3．免疫调节试验：颈椎脱臼法处死C₅₇/B1/6.小鼠，无菌取出脾脏，用Hank’s液研磨，离心弃上清后用Tris-NH₄Cl(pH7.2)溶解红细胞，Hank’s液洗涤离心弃上清后用体积分数比10％小牛血清的RPMI-1640完全培养基重新悬起并计数，调脾细胞数备用。采用MTT法评价怀牛膝皂甙对刀豆素A和脂质糖诱导的T淋巴细胞增殖和B淋巴细胞增殖的影响，试验表明，该药物在10～100μg/ml浓度时，对小鼠机体的细胞免疫和体液免疫有增强作用。

4．急性毒性试验：昆明种小鼠18～22克，随机分组，每组10只，雌雄各半，经小鼠腹腔注射给药，LD₅₀为960mg/kg体重，表明该药物毒性小。

本发明与现有技术相比，具有如下优点：

1．本发明提供的抗癌药物具有抗癌活性强、毒性小的特点，而且抗癌机制独特，与增强机体的免疫力有关，具有较好的临床实用价值。