[发明专利]一种新的多肽——人L－3－磷酸丝氨酸磷酸酶10.01和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶10.01，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶是L-丝氨酸形成第三步也就是最后一步的催化酶。该酶不仅催化依赖镁离子的L-丝氨酸水解，还催化L-丝氨酸和L-磷酸丝氨酸之间的转换反应[L.F.Bork enh，Agen，E.P.Kennedy，Biochim.Biophys.Acta28(1958)222-223]。事实上，L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶催化L-丝氨酸和L-磷酸丝氨酸之间的转换反应和它能被L-丝氨酸非竞争性抑制表明L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶的机理与磷酸酶的形成有关。

在形成磷酸酶之后是许多磷酸转移酶参与的反应。实验表明这些磷酸转移酶中有4种不同类型的氨基酸残基与磷酸发生了共价结合：碱性磷酸酶中的丝氨酸[L.Engstrom，Biochim

Biophys.Acta52(1961)49-59]；酸性磷酸酶和果糖2，6-二磷酸酶以及磷酸甘油酸变位酶中的组氨酸[M.Igarashi，H.Takahashi，N.Tsuyama，Biochim.Biophys.Acta220(1970)85-92]；钠离子/钾离子ATP酶家族ATP酶的天门冬氨酸[R.L.Post，S.Kume，J.Biol.Chem.248(1973)6993-7000]；酪氨酸磷酸酶中的半胱氨酸[K.L.Guan，J.E.Dixon，J.Biol.Chem.266(1991)17026-17030]。因为在L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶中并没有保守的半胱氨酸或组氨酸，所以这两个氨基酸残基很可能与该酶无关。此外，碱性磷酸酶和羟胺磷酸酶的不稳定性表明在磷酸天门冬氨酸或磷酸谷氨酸中形成了酰基磷酸键。

L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶有两个高度保守的包含天门冬氨酸残基的基元：DXDST和GDGXXD。其中DXDST基元与钠离子/钾离子ATP酶家族ATP酶共有的磷酸化位点共享两个氨基酸残基：D和T。而GDGXXD基元也在人钠离子/钾离子ATP酶α亚基713-718个氨基酸残基中存在。这些结果表明磷酸丝氨酸磷酸酶和ATP酶是功能同系物[Jean-Fra

Ncois Collet，Iabelle Gerin，Mark H.Rider et al.，FEBSLett.408(3)(1997)，281-284]。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶10.01。

由于如上所述人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶10.01蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶10.01蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶10.01蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶10.01以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶10.01的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶10.01的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶10.01的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶10.01的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶10.01的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人L-3-磷酸丝氨酸磷酸酶10.01异常相关的疾病的方法。